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本制品使用具有超强扩增性能的热启动BAPA3G DNA聚合酶和优化的多重PCR反应缓冲液，使其可有效扩增20重以上的PCR，具有极高的灵敏度，最大程度上减少了反应体系优化步骤。

Multiplex PCR又称多重PCR，是指在同一PCR反应体系里加上两对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应，已被广泛应用于科学研究和疾病诊断等多个领域，特别适用于微量样本的多位点检测。

• BAPA3G DNA聚合酶，超强扩增性能，极高抗杂质能力。
  
• 完全封闭的热启动特性，50℃以下100%无活性。
  
• 优化的反应缓冲体系，避免非特异性扩增。
  
• 高灵敏度，有效扩增0.1ng的人基因组DNA（20重）。

• 当模板GC含量>70%时，请添加5×PCR增强剂。
  
• 推荐引物设计原则：引物长度保持在22～30bp，扩增产物长度在2kb以下，GC含量50%～60%，尽量减少各引物之间TM的差值。
  
• 检测单引物特异性：多重PCR反应前，应对设计的引物逐一扩增，以确定是否有非特异性扩增和扩增效率。
  
• 引物推荐使用浓度：推荐扩增片段<300bp每条引物的反应终浓度为0.2～0.3μM，扩增片段>300bp每条引物的反应终浓度为0.05～0.15μM，如某些目标片段产量偏低或偏高，可适度调整其对应引物使用量以优化反应结果。
  
• 反应前需将引物制成10×Primer Mix：
  

  引物储存液	用量	10×浓度
  引物1 F(100μM)	1μL	1μM
  引物1 R(100μM)	1μL	1μM
  引物2 F(100μM)	0.5μL	0.5μM
  引物2 R(100μM)	0.5μL	0.5μM
  …………
  引物n F(100μM)	3μL	3μM
  引物n R(100μM)	3μL	3μM
  ddH2O	至100μL	-

• 按下表配制反应体系并混合均匀：
  

  成分	用量
  2×BAPA3G Multiplex PCR Mix	12.5μL
  10×Primer Mix	2.5μL
  模板DNA	0.1～100ng
  ddH2O	至25μL

  • 模板DNA推荐用量：100ng(gDNA)，100pg(质粒)，1～5μL(cDNA)。
• PCR扩增循环参数
  

  步骤	温度	时间
  预变性	95℃	5min
  30～35 循环	95℃	20s
  	57～60℃	60s
  	72℃	2kb/min
  末延伸	72℃	10min

  • 该制品为热启动制品预变性步骤5min不可缩短，否则DNA聚合酶无法恢复活性。
• 电泳：1kb以内的扩增产物建议使用3%～4%琼脂糖凝胶，电压使用80V，可以有效的分离各扩增片段。

图1．使用2×BAPA3G Multiplex PCR Mix进行20重PCR扩增；用0.1ng、1ng、10ng和100ng的人基因组分别扩增30和35个循环，4%的琼脂糖凝胶，80V电泳300min，如图所示本制品对不同量的模板具有很好的兼容性，且灵敏度可至0.1ng。	图2．使用2×BAPA3G Multiplex PCR Mix分别用不同的模板进行20重PCR扩增，泳道1-5分别为：1μL抗凝全血分离的白细胞（相当于5μL抗凝全血）、1μL抗凝全血、1μL血清、1μL含50ng human gDNA的血清和50ng human gDNA，结果显示本制品具有较强的抗杂质能力，对于全血等样品也能较好的扩增。
图3．使用2×BAPA3G Multiplex PCR Mix和Supplier A和Supplier B的同类产品进行15重PCR扩增，比较如下图，可见本制品扩增性能较其他同类产品具有卓越的扩增性能。